MiR-92bⅠ抑制胶质瘤恶性表型体外研究

【摘要】背景和目的：脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,由于恶性胶质瘤有侵袭性生长、增殖速度快等特征,应用目前的治疗措施如外科手术切除、术后放疗、化疗和免疫治疗等不能治愈,患者复发率很高,临床预后甚差。造成这种现状的原因,很大部位是对脑胶质瘤的病因,发病机制的认识不充分。为此,必须寻找与胶质瘤发生、发展相关的基因和信号通路,进一步深入了解胶质瘤发生发展的分子病理机制,寻找胶质瘤治疗的新靶点,在此基础上开拓胶质瘤治疗的新策略和新手段。有研究证实,Nemo-likekinase(NLK)是一种抑癌基因,在体外的恶性肿瘤细胞株中的研究发现它可以通过促进肿瘤细胞的凋亡而起到抑癌作用,研究表明NLK能够促进人的结肠癌细胞DLD-1细胞株,乳腺癌细胞株和胶质瘤细胞株的凋亡[1-3]。但NLK在脑胶质瘤中的研究甚少,故可以初步认定NLK是一个胶质瘤抑癌基因。此外,为了寻找可调控NLK表达的microRNA,我们搜索了预测microRNA靶基因网站,包括TARGETSCAN,MIRANDA等,发现有很多的microRNA,包括niR-92b在NLKmRNA3’UTR上有潜在的结合位点,故本课题重点研究了miR-92bI抑制胶质瘤增殖、细胞周期进展、凋亡和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法和结果：本课题研究分为以下两个部分：第一部分中应用RealtimePCR的方法,检测了5个胶质瘤细胞系和38例不同级别人脑胶质瘤组织中miR-92b的表达水平。结果表明miR-92b在胶质瘤组织和细胞系中的表达较正常组织上调,并与肿瘤级别呈正相关。在课题第二部分,miR-92bⅠ抑制胶质瘤恶性表型的体外研究。将niR-92bⅠ转染至人脑胶质瘤细胞系SNB19和LN229中。采用RealtimePCR检测转染后胶质瘤细胞的miR-92b表达水平以鉴定抑制效果；四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验评价细胞的增殖率；流式细胞术检测细胞周期变化；AnnexinⅤ法检测细胞早期凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力变化。RealtimePCR检测结果显示转染miR-92bⅠ后,肿瘤细胞miR-92b表达下降,miR-92bⅠ组细胞增殖活性降低,细胞侵袭能力明显受到抑制,细胞周期S期缩短,阻滞在G0/G1期以及早期凋亡增加。该实验说明miR-92b是癌微RNA(OncomiRs),可能成为胶质瘤治疗的潜在靶点。结论：miR-92b在胶质瘤中表达上调,低级别肿瘤与高级别肿瘤比较,其差异具有显著性,但是正常组织与低级别肿瘤比较,差异没有显著性。转染miR-92bⅠ至人胶质瘤细胞系,可抑制胶质瘤细胞的增殖活性和侵袭能力,细胞周期S期缩短,阻滞在G0/G1期,并促进细胞凋亡,由此,初步认定miR-92b为癌微RNA,可成为胶质瘤基因治疗的候选靶标。这是首次有关miR-92b在人脑胶质瘤中的表达以及对胶质瘤恶性表型的影响的研究报道,为进一步认识脑胶质瘤的分子病理机制及新一类的靶向治疗提供实验依据。
【作者】万英锋；
【导师】王义荣；
【作者基本信息】浙江大学，外科学，2014，硕士
【关键词】胶质瘤；微RNA92b；增殖；侵袭；凋亡；

【参考文献】
[1]田婉容,王美兰,陈文娟,池毓务.功能化石墨烯量子点快速合成及分析应用[A].中国化学会光化学专业委员会.第十三届全国光化学学术讨论会论文集[C].中国化学会光化学专业委员会:,2013:1.
[2]张蓉.企业财务报表改进研究[D].西北大学,会计学,2012,硕士.
[3]高维佳.伴与不伴精神病性症状的儿童青少年双相情感障碍患者的脑影像学研究[D].中南大学,临床医学,2014,博士.
[4]陈学辉.磁盘阵列双控制器缓存镜像技术研究[D].华中科技大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[5]罗大勇.中外农业合作社比较研究[D].武汉工业学院,农村与区域发展（专业学位）,2012,硕士.
[6]林弘宇,田世明.智能电网条件下的智能小区关键技术[J].电网技术,2011,12:1-7.
[7]陈思思.民事检察建议制度研究[D].内蒙古大学,诉讼法学,2014,硕士.
[8]沈丽芳,冯志仙,赵雪红,徐红,沈丽娜,徐巧君,黄丽华.急性心肌梗死单病种护理质量评价标准的研究[J].护理与康复,2014,04:310-313.
[9]沙彦茹.循环抗阻训练对大学生心肺功能、肌肉适能及身体成分的影响[D].西安体育学院,体育教学,2013,硕士.
[10]樊磊.基于对应分析的变质岩地区高光谱遥感岩性分类[D].首都师范大学,地图学与地理信息系统,2013,硕士.
[11]乔景全.QFD在A公司新产品开发阶段的应用研究[D].苏州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[12]阎静.鄂州牌子锣的传承调查与保护研究[D].华中师范大学,农村与区域发展,2014,硕士.
[13]王倩倩.关于医院编外人员管理现象及措施分析[D].华东理工大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[14]刘世翔.网络入侵检测系统研究与实现[D].吉林大学,2004.
[15]刘笑菲.稳心颗粒通过增强Cx43表达抗心肌缺血作用的研究[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[16]甘涛.甘肃省文化产业融资困境及突破口分析[D].兰州商学院,金融学,2013,硕士.
[17]王松引.北欧女性雕塑家公共艺术创作探析[J].设计,2014,12:133-134.
[18]戴磊.间充质干细胞~(TRAIL)双重靶向治疗胰腺癌的在体实验研究[D].宁波大学,外科学,2014,硕士.
[19]刘艳松.小型地面移动侦察机器人设计[D].吉林大学,机械工程,2012,硕士.
[20]刘慧婷.EMD方法的研究与应用[D].安徽大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[21]杨金茹.碳化硅多孔陶瓷的制备及其性能研究[D].牡丹江师范学院,凝聚态物理,2012,硕士.
[22]盛雪.汉西“什么”与“qué”的对比分析及在翻译中的应用[D].上海外国语大学,西班牙语语言文学,2013,硕士.
[23]严镇圣.一种测井资料的分层定厚方法[J].石油地球物理勘探,1981,02:76-80.
[24]许晓阳,郝春梅.不锈钢车体的工装化应用[J].城市轨道交通研究.2008(05)
[25]张丽莉.江门广播电视台绩效管理研究[D].华南理工大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[26]许敬.多元智能、学习策略与英语成绩的相关性研究[D].河北师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[27]诸葛木子.基于计算机图像处理的作物叶部病害提取方法与技术研究[D].中国地质大学（北京）,信息与通信工程,2014,硕士.
[28]龚仓.典型环境介质中重金属种态研究[D].成都理工大学,分析化学,2013,硕士.
[29]邱小东.跨国银行在中国新设投资和并购比较研究[D].江西财经大学,金融学,2004,硕士.
[30]王学明.应用于液相醇选择氧化反应的负载钯催化剂研究[D].南开大学,2012.
[31]陈敏.现金持有量与上市公司研发支出的相关性研究[D].安徽大学,会计学,2013,硕士.
[32]嵇小辅,苏宏业,楮健.不确定离散系统的峰峰增益优化：矩阵不等式方法(英文)[J].自动化学报,2007,07:753-756.
[33]徐玉祥.呼和浩特市高中生作文教学现状调查及对策研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[34]肖泽原.我国农村集体经营性建设用地“入市”的法律思考[D].湖南师范大学,法律（专业学位）,2014,硕士.
[35]肖琴.基于主观倾向性分析的微博群体信息采集研究[D].华中师范大学,情报学,2013,硕士.
[36]綦方中.敏捷供应链管理中几个决策问题的研究[D].浙江大学,2003.
[37]李楠,曲长文,平殿发,苏峰.基于分布式传感器信息融合的辐射源识别[J].控制与决策,2010,12:1793-1798.
[38]朱赟.基于变形决策树的图像方向判别和应用[D].上海师范大学,2003.
[39]甄祎.版式突破的研究[D].河北师范大学,美术学,2014,硕士.
[40]郭鑫,任海鹏.三相PWM变换器的鲁棒变结构控制[J].自动化学报,2015,03:601-610.
[41]邱磊.球孢白僵菌组氨酸激酶家族、核激酶Weel和磷酸化酶Cdc25的功能解析[D].浙江大学,微生物学,2014,博士.
[42]韩钧宇.基于稀疏模型的高精度光流估计方法研究[D].西安电子科技大学,智能信息处理,2012,硕士.
[43]万祎.现代汉语方言称量常见家养动物的个体量词研究[D].华中师范大学,汉语言文字学,2014,硕士.
[44]皮文彬.中学双语教学的实践与思考[D].华东师范大学,教育经济与管理,2002,硕士.
[45]吕慧.二氧化钛基复合光催化剂的制备及其性能研究[D].华东理工大学,材料科学与工程,2014,硕士.
[46]韦舟玲.VEGF及其可溶性受体（sflt-1）在早期复发性流产患者中的表达及临床意义[D].广西医科大学,妇产科学,2013,硕士.
[47]张豪夫.高速列车数据的多通道处理方法[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[48]何方.经验似然方法及其在中国石油价格趋势预测中的应用研究[D].湖南师范大学,统计学,2014,硕士.
[49]蔡弘扬.运动训练对自发性高血压大鼠血压的影响及其与中枢血管紧张素转换酶2的关系[D].福建医科大学,病理学与病理生理学,2014,硕士.
[50]唐夏雯.大学英语写作课堂中的同伴反馈研究[D].苏州大学,课程与教学论,2013,硕士.